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百瑞極——填料系列4--親和層析填料

親和層析是一種通過(guò)分子間的特異性識(shí)別和相互作用來(lái)分離純化物質(zhì)的層析方法。如酶與底物、抗原和抗體之間專一的相互作用等。將其一作為配基固定在填料上,就可以從初始樣品中吸附相應(yīng)的生物分子,然后通過(guò)合適的洗脫將其解離達(dá)到純化的目的。


技術(shù)優(yōu)勢(shì)

親和層析具有高選擇性、高分辨率、高結(jié)合載量的優(yōu)點(diǎn),經(jīng)??梢砸徊郊兓_(dá)到>90%的純度,能夠完成一般方法很難完成的分離。


實(shí)驗(yàn)步驟

●首先,選擇合適的緩沖液平衡層析柱,以保證目標(biāo)分子與配體的結(jié)合效率在最佳范圍內(nèi)。

●上樣時(shí),目標(biāo)分子多數(shù)結(jié)合在配體上,由于混合樣品中的雜質(zhì)不能與配基有效的結(jié)合而流穿下來(lái)。

●上樣完成后,層析柱上通常含有非特異性吸附的雜質(zhì)分子,需要先將這些雜質(zhì)洗脫。

●雜質(zhì)取出后,再利用洗脫液將目標(biāo)分子從配體上洗脫下來(lái)。

●親和層析的洗脫類型分為非競(jìng)爭(zhēng)性洗脫(改變緩沖液的組成,如離子強(qiáng)度,改變pH等)和競(jìng)爭(zhēng)性洗脫(目標(biāo)分子類似物和配體類似物等)。


應(yīng)用方向

●親和層析具有高選擇性、高分辨率、高結(jié)合載量的優(yōu)點(diǎn),經(jīng)常可以一步純化達(dá)到>90%的純度,能夠完成一般方法很難完成的分離。


親和層析填料命名規(guī)則

配基+基架類型+基球特性


配基的不同,對(duì)應(yīng)應(yīng)用場(chǎng)景也不相同。


鎳-:分離帶His標(biāo)簽的重組蛋白及能被金屬離子吸附的多肽、蛋白、核苷酸、磷酸化蛋白。


鎳NTA瓊脂糖凝膠FF:具特異性好流速快,螯合鎳更穩(wěn)定,能耐受更高的還原劑,物理和化學(xué)穩(wěn)定性好,批次重復(fù)性好。已經(jīng)螯合好鎳離子,使用更方便,由于顆粒粒度均勻,粒徑小,所以分離效果更好,可完全代替進(jìn)口產(chǎn)品。 


藍(lán)色&紅色:親和層析介質(zhì),純化干擾素、α2-巨球蛋白、凝血因子、需要核苷酸輔助的酶


肝素:肝素能和抗凝血因子Ⅲ、凝血因子、蛋白合成因子、脂蛋白、干擾素、核酸結(jié)合蛋白、限制內(nèi)切酶、凝血酶及類凝血酶等生物大分子結(jié)合,所以肝素瓊脂糖凝膠可以用于這類物質(zhì)的純化。


谷胱甘肽:親和層析介質(zhì),純化羧端含谷胱甘肽 S-轉(zhuǎn)移酶重組融合蛋白或依賴 S-轉(zhuǎn)移酶或谷胱甘肽的蛋白。


胰蛋白酶:親和層析介質(zhì),純化胰蛋白酶抑制劑、抑肽酶。


苯甲脒:純化胰蛋白酶、凝血酶、尿激酶、激肽釋放酶、前激肽釋放酶等絲氨酸蛋白酶。


ConA:純化糖蛋白、膜蛋白、糖脂、多糖、帶甘露糖苷或葡萄糖苷殘基的膜囊泡,激素,脂蛋白等。


賴氨酸:純化血纖維蛋白溶酶原等。


羧基:純化含有氨基配體的物質(zhì)等。


明膠:純化或去除血纖維結(jié)合蛋白等。


精氨酸:前激肽釋放酶,纖溶酶原激活物,凝血酶原和成熟促進(jìn)因子等。



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